SUMO融合体系具有促进可溶性表达、促进蛋白质正确折叠、保护蛋白质免受蛋白酶水解的作用，且SUMO蛋白酶（SUMO Protease）的特异性识别切割，可以完全去除SUMO标签，最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。
永利集团3044am官方入口SUMO蛋白酶为使用E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶，带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除蛋白酶。
使用SUMO标签进行蛋白表达流程
融合蛋白SUMO标签剪切去除。
在1×SUMO Protease Buffer（50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM DTT）中，30°C反应1h，剪切>85％的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
-80℃条件下可保存2年；-20°C条件下可保存6个月；避免反复冻融。
1. 酶切条件
推荐4℃酶切过夜，使用者可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索。
2. 酶切条件的优化
由于不同目的蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和待酶切的目的蛋白的比例进行适当优化。以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。
a. 将反应混合物放置于30℃反应1 h。如果目的蛋白在30℃不稳定，可以考虑4℃反应过夜（16 h左右）。
b. 带有SUMO标签的目的蛋白酶切反应的温度与时间，可以视情况进行适当调整，具体参考如下表格。
| 反应温度 | 反应时间 |
|---|---|
| 4℃ | 16 h |
| 16℃ | 4 h |
| 1.5 h | 1000 U |
| 30℃ | 1 h |
c. 取20 µL样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中，如果有必要，还可以在上述反应的不同时间点取少量样品，后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。
Lane1：纯化的SUMO融合蛋白X 2µg
Lane2：纯化的SUMO蛋白酶 2µg
Lane3-6：SUMO蛋白酶的用量从左至右依次为0.25U、0.5U、1U、2U，30℃酶切反应1 h，取样进行SDS-PAGE电泳
Lane7：Lane6酶切条件放大，酶切后样品与Ni-NTA Resin结合后的流穿
SUMO酶切及镍柱回收参考图
3.酶切与纯化
后续可以按照上述优化的反应条件，放大反应体系进行目的蛋白SUMO标签的切除反应。反应结束后，可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMO标签，以及带有His标签的本品，从而获得高纯度的无标签目的蛋白。
1. 为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。
2. 对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶所需NaCl的浓度不同的蛋白情况会有所差别，可根据实际情况在0～300 mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。
3. 反应体系中咪唑的浓度应低于150 mM，否则SUMO蛋白酶的活性会受到抑制。
4. 本产品仅适用于科研用途。
3044am永利(集团)官方网站-歡迎您！ Nanjing Detai Bioengineering Co.,Ltd. ©2024 All Rights Reserved
苏公网安备32011202001300